細(xì)胞室一般就是負(fù)責(zé)單克隆抗體、HIV、體細(xì)胞等治療制劑和診斷試劑、生產(chǎn)用細(xì)胞及牛血清等檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室;并包括負(fù)責(zé)相應(yīng)品種國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)、一類(lèi)新藥和進(jìn)口藥品標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)審核、復(fù)核、修訂或起草等;負(fù)責(zé)相應(yīng)品種國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制、標(biāo)定和分發(fā);開(kāi)展相應(yīng)技術(shù)方法研究及技術(shù)人員培訓(xùn)。
病理科細(xì)胞室主要服務(wù)于臨床,為臨床醫(yī)生提供及時(shí)而準(zhǔn)確的細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果,它通過(guò)無(wú)創(chuàng)或微創(chuàng)的方式,既減輕病人檢查時(shí)的痛苦又可以獲得客觀的結(jié)果。
一、細(xì)胞室如何設(shè)置
1.無(wú)菌操作細(xì)胞室:
1)由更衣間、緩沖間和操作間三部分組成。
2)更衣間:位于培養(yǎng)室zui外部,用于更換潔凈的衣帽鞋口罩。放置消毒的防護(hù)服、衣帽柜、鞋柜。
3)緩沖間:位于更衣間與操作間之間,目的是為了保證操作間的無(wú)菌環(huán)境。放置電冰箱、液氮灌、消毒好的無(wú)菌物品等。
4)操作間:位于內(nèi)部,于無(wú)菌操作、細(xì)胞培養(yǎng)。放置凈化工作臺(tái)及二氧化碳培養(yǎng)箱,離心機(jī),倒置顯微鏡等。
房間要求:獨(dú)立房間,按潔凈廠房要求建造,并需要保持空氣消毒和清潔無(wú)塵:
1)紫外線(xiàn)燈—產(chǎn)生臭氧,并且室內(nèi)溫度及濕度均較高,不利于工作人員健康。
2)空氣過(guò)濾的恒溫恒濕裝置的空氣潔凈度級(jí)別如下:
注:空氣潔凈度級(jí)別表:一般普通培養(yǎng)室常選用100000級(jí)的。
2. 準(zhǔn)備室:常設(shè)置在無(wú)菌操作細(xì)胞室外部,主要進(jìn)行培養(yǎng)液及有關(guān)培養(yǎng)用的液體等的制備。主要設(shè)置:離心機(jī)、水浴鍋、定時(shí)鐘表、普通天平及日常分析處理物。
3. 洗刷消毒間:要和其他區(qū)域分開(kāi),獨(dú)立一室,主要用于各種培養(yǎng)器皿的清洗、準(zhǔn)備和消毒,常設(shè)置:烘箱、高壓蒸汽消毒鍋、去離子水或者蒸餾水處理器、酸缸、水槽刷子等。
二、細(xì)胞室常用的基本設(shè)備
1.儀器:
1)超凈工作臺(tái)-常用側(cè)流式(垂直流)工作臺(tái),潔凈度應(yīng)達(dá)到100級(jí)。國(guó)內(nèi)產(chǎn)品一般都可以達(dá)標(biāo)。視場(chǎng)地大小選用一個(gè)較寬的或者多個(gè)較小的。
2)顯微鏡:倒置熒光顯微鏡,若有條件,尚可配置帶有照相系統(tǒng)的高質(zhì)量相差顯微鏡、解剖顯微鏡、錄像系統(tǒng)或縮時(shí)電影拍攝裝置等,以便隨時(shí)觀察、記錄、攝影細(xì)胞生長(zhǎng)情況。
3)CO2培養(yǎng)箱:需國(guó)外產(chǎn)品。
4)干燥箱:電熱干燥箱升溫較高,一般需達(dá)到160℃以上。國(guó)內(nèi)產(chǎn)品可達(dá)標(biāo)。
5)水純化裝置:產(chǎn)生去離子水,可用三蒸水替代。
6)冰箱:低溫冰箱(-20℃)可選國(guó)內(nèi)的、超低溫冰箱(-70,80C,)需要國(guó)外產(chǎn)品。
7)液氮罐:國(guó)內(nèi)產(chǎn)品可。
8)離心機(jī):國(guó)內(nèi)產(chǎn)品可,低速離心機(jī)即可,不需要低溫冷凍。用于細(xì)胞沉降,高速不好。
9)精密電子天平:國(guó)產(chǎn)即可,需達(dá)到精密度:分析天平的感量為0.1mg、0.01mg和0.001mg。
10)消毒器:高壓蒸汽消毒鍋,國(guó)產(chǎn)。
11)濾器:用于過(guò)濾培養(yǎng)基,國(guó)產(chǎn)進(jìn)口都可。
2.常用的培養(yǎng)器皿:
1)培養(yǎng)瓶:由玻璃或塑料制成。主要用于培養(yǎng)、繁殖細(xì)胞。進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)瓶瓶口加蓋螺旋瓶蓋或膠塞,膠塞多用于密封培養(yǎng)。國(guó)產(chǎn)培養(yǎng)瓶的規(guī)格以容量(ml)表示,如250ml、100ml、25ml等;進(jìn)口培養(yǎng)瓶則多以底面積(cm2)表示。
2)培養(yǎng)皿:由玻璃或塑料制成,供盛取、分離、處理組織或做細(xì)胞毒性、集落形成、單細(xì)胞分離、同位素?fù)饺?、?xì)胞繁殖等實(shí)驗(yàn)使用。常用的培養(yǎng)皿規(guī)格有10cm、9cm、6cm、3.5cm等。
3)多孔培養(yǎng)板:為塑料制品??晒┘?xì)胞克隆及細(xì)胞毒性等各種檢測(cè)實(shí)驗(yàn)使用。其優(yōu)點(diǎn)是節(jié)約樣本及試劑,可同時(shí)測(cè)試大量樣本,易于進(jìn)行無(wú)菌操作。培養(yǎng)板分為各種規(guī)格,常用的規(guī)格有:96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。
4)培養(yǎng)操作有關(guān)的器皿:
a)貯液瓶:主要用于存放或配制各種培養(yǎng)用液體如培養(yǎng)液、血清及試劑等。貯液瓶分為各種不同規(guī)格,如1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml、5ml等。
b)吸管:主要分為刻度吸管、無(wú)刻度吸管??潭任苤饕糜谖?、轉(zhuǎn)移液體,常用的有1ml、2ml、5ml、10ml等規(guī)格。無(wú)刻度吸管分為直頭吸管及彎頭吸管,除可以作吸取、轉(zhuǎn)移液體外,彎頭尖吸管還常用于吹打、混勻及傳代細(xì)胞。
c)加樣器(移液器):用于吸取、移動(dòng)液體或滴加樣本??筛鶕?jù)需要調(diào)節(jié)量的大小,吸量準(zhǔn)確、方便。尤以微量加樣器,可保證實(shí)驗(yàn)樣品(或試劑)含量,重復(fù)性良好。目前,可高溫消毒的,多通道的各類(lèi)移液器可供使用者選擇,能確保加樣準(zhǔn)確、快速、方便并且達(dá)到無(wú)菌要求。
d)其他用品:尚有收集細(xì)胞用的離心管,放置試劑或臨時(shí)插置吸管用的試管,裝放吸管以便消毒的玻璃或不銹鋼容器,用于存放小件培養(yǎng)物品便于高壓消毒的鋁制飯盒或貯槽,套于吸管頂部的橡膠吸頭,封閉各種瓶、管的膠塞、蓋子、凍存細(xì)胞用的安瓿或凍存管、不同規(guī)格的注射器、燒杯和量筒以及漏斗,超凈工作臺(tái)使用的酒精燈,供實(shí)驗(yàn)人員操作前清潔消毒手使用的盛有酒精或其他消毒液的微型噴壺等。
三、細(xì)胞室管理規(guī)章制度
細(xì)胞室是進(jìn)行各種細(xì)胞培養(yǎng)的凈化級(jí)實(shí)驗(yàn)室,所有進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的人員都必須遵守實(shí)驗(yàn)室有關(guān)的規(guī)章制度,接受實(shí)驗(yàn)室管理人員的管理。
*章 總則
*條細(xì)胞室主要由團(tuán)隊(duì)內(nèi)相關(guān)科研人員使用,原則上不對(duì)外開(kāi)放,其他人員如確實(shí)需使用細(xì)胞室必須預(yù)先征得實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人和細(xì)胞室負(fù)責(zé)人同意。
第二條進(jìn)出細(xì)胞室實(shí)驗(yàn)需要嚴(yán)格登記。如有不符合實(shí)驗(yàn)室工作和生物安全要求的,實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人和細(xì)胞室工作人員有權(quán)責(zé)令整改。
第三條使用人員需參加專(zhuān)門(mén)的細(xì)胞室使用規(guī)范培訓(xùn)并通過(guò)考核后,方可獲準(zhǔn)進(jìn)入細(xì)胞室進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。嚴(yán)禁未經(jīng)許可擅自進(jìn)入細(xì)胞室或使用相關(guān)設(shè)備。
第四條細(xì)胞室正常使用過(guò)程中,人員進(jìn)出應(yīng)通過(guò)緩沖間和風(fēng)淋間;進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室的器械和樣品需通過(guò)傳遞窗,嚴(yán)禁隨身帶入。實(shí)驗(yàn)用品應(yīng)盡量一次帶入,嚴(yán)禁將與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的物品帶入實(shí)驗(yàn)室,在細(xì)胞室內(nèi)不得進(jìn)行微生物等其它易污染物的培養(yǎng),禁止從事任何高危生化實(shí)驗(yàn)。
第五條實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)愛(ài)護(hù)實(shí)驗(yàn)室各類(lèi)儀器,按照規(guī)則使用并保持設(shè)備清潔。實(shí)驗(yàn)中的昂貴設(shè)備,未經(jīng)許可不得擅自開(kāi)關(guān)。精密儀器需經(jīng)專(zhuān)門(mén)培訓(xùn)后方能操作未經(jīng)許可不得改變?cè)O(shè)備儀器的預(yù)設(shè)參數(shù)。設(shè)備儀器出現(xiàn)故障或發(fā)生事故,應(yīng)及時(shí)向?qū)嶒?yàn)室負(fù)責(zé)人報(bào)告,安排專(zhuān)業(yè)人員進(jìn)行檢修。
第二章 條例
*條 常規(guī)操作
1.穿著實(shí)驗(yàn)服。實(shí)驗(yàn)人員必須在細(xì)胞室緩沖間內(nèi)更換細(xì)胞室實(shí)驗(yàn)服,嚴(yán)禁不穿實(shí)驗(yàn)服或直接穿著普通實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)服進(jìn)入細(xì)胞室。
2.穿著拖鞋。在準(zhǔn)備間換下自己的鞋子,盡量避免在緩沖間走動(dòng)、停留。
3.細(xì)胞室zui多可6個(gè)人同時(shí)使用。
4. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中嚴(yán)禁喧嘩,閑聊,反復(fù)進(jìn)出細(xì)胞室。
第二條 培養(yǎng)箱使用規(guī)則
1. 從培養(yǎng)箱取放物品前,用酒精清潔雙手(或手套),盡量縮短開(kāi)門(mén)時(shí)間和減少開(kāi)門(mén)次數(shù)。
注: 培養(yǎng)箱中的空氣是經(jīng)過(guò)過(guò)濾的潔凈空氣。長(zhǎng)時(shí)間敞開(kāi)或頻繁開(kāi)關(guān)培養(yǎng)箱,容易造成污染。
2.從培養(yǎng)箱拿取細(xì)胞時(shí)輕拿輕放,動(dòng)作迅速,隨手關(guān)緊培養(yǎng)箱門(mén)。未經(jīng)允許,禁止翻看、移動(dòng)他人細(xì)胞或樣品,如有特殊需要的,請(qǐng)實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人協(xié)調(diào)。
3. 培養(yǎng)瓶皿放入培養(yǎng)箱前,用酒精消毒表面,并稍等至酒精揮發(fā)后再放入,以免培養(yǎng)箱內(nèi)滯留過(guò)多乙醇蒸氣。
4. 培養(yǎng)箱內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)的放置需整潔有序,方便查找,同時(shí)應(yīng)盡量提高培養(yǎng)箱的使用效率,負(fù)責(zé)老師可視實(shí)驗(yàn)情況啟用或停止空培養(yǎng)箱的使用,節(jié)約資源。
5. 普通培養(yǎng)中的細(xì)胞,若非實(shí)驗(yàn)特殊需要,每瓶/板細(xì)胞每天只需要觀察生長(zhǎng)狀態(tài)一次,2人以上共用的細(xì)胞,可約好時(shí)間一起觀察。
注:頻繁將細(xì)胞拿出觀察,容易給培養(yǎng)箱造成污染,同時(shí)也會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)條件的恒定。
6.原代細(xì)胞需放置在原代培養(yǎng)培養(yǎng)箱培養(yǎng),不得放置于其他培養(yǎng)箱,如一段時(shí)間內(nèi)無(wú)原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn),負(fù)責(zé)人可協(xié)調(diào)安排培養(yǎng)箱供其他細(xì)胞培養(yǎng)使用。
7.實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)經(jīng)常注意檢查培養(yǎng)箱溫度、CO2氣體量是否相符設(shè)定值。密切注意培養(yǎng)箱內(nèi)的增濕盤(pán),定期更換無(wú)菌水并進(jìn)行消毒。密切注意培養(yǎng)箱內(nèi)情況,如出現(xiàn)霉變、菌斑、支原體和衣原體感染或其他明顯染菌跡象,應(yīng)立即通知管理員及其它使用者。
第三條 顯微鏡使用規(guī)則
1.倒置相差顯微鏡使用前,用酒精棉從中間至周?chē)潦幂d物臺(tái)。
2.離開(kāi)細(xì)胞室時(shí)或較長(zhǎng)時(shí)間不需使用時(shí),及時(shí)關(guān)上電源,延長(zhǎng)燈泡壽命。盡量避免頻繁開(kāi)關(guān)顯微鏡電源。
3.一次細(xì)胞實(shí)驗(yàn)使用完畢后,在顯微鏡使用記錄本上登記。
4.熒光顯微鏡屬于貴重儀器需遵循貴重儀器預(yù)約使用規(guī)程。
第四條 超凈臺(tái)相關(guān)操作規(guī)則
1.超凈臺(tái)使用遵循預(yù)約原則。在細(xì)胞室入口處預(yù)約,細(xì)胞室內(nèi)填寫(xiě)使用登記。
a:無(wú)預(yù)約者若有必要在他人預(yù)約時(shí)段內(nèi)使用,需先征得預(yù)約者的同意,否則應(yīng)無(wú)條件讓出工作臺(tái),以免耽誤他人實(shí)驗(yàn)。
b:使用記號(hào)筆在預(yù)約表格上提前預(yù)約下一周的使用時(shí)間,請(qǐng)注意周六周日是指上周的周末。
c:預(yù)約內(nèi)容請(qǐng)包括:時(shí)間范圍,姓名,如特殊實(shí)驗(yàn)請(qǐng)寫(xiě)明。
2.超凈臺(tái)使用前用紫外燈照射15分鐘滅菌,使用前、后需用酒精棉球擦拭工作區(qū)消毒,所有物品放入超凈臺(tái)內(nèi)使用前均應(yīng)消毒,超凈臺(tái)內(nèi)嚴(yán)禁堆放過(guò)多物品影響風(fēng)路平衡,不同超凈臺(tái)內(nèi)物品嚴(yán)禁頻繁交換使用。
3.點(diǎn)燃酒精燈前需檢查瓶中酒精是否足夠,液面應(yīng)占瓶高1/3-2/3。
注: 消毒用75%的酒精,酒精燈用95%以上的酒精,向噴壺或燈內(nèi)添加酒精時(shí)請(qǐng)留意。
4.超凈臺(tái)中應(yīng)擺放廢液杯,用于暫時(shí)存放廢棄物,實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將杯內(nèi)加入NaOH溶液處理片刻,廢液垃圾倒入水池并同時(shí)用水沖釋?zhuān)腆w垃圾倒入生物樣品垃圾桶中。
注: 廢液缸應(yīng)及時(shí)處理,嚴(yán)禁長(zhǎng)時(shí)間放置,以免留有大量培養(yǎng)液滋生細(xì)菌。
5.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)后任何含有細(xì)胞培養(yǎng)污物的培養(yǎng)瓶,離心管,移液管等必須及時(shí)帶出細(xì)胞房。
第五條 器具的清洗規(guī)則
1.可回收的移液管、離心管、培養(yǎng)瓶皿等,放入裝有清水的塑料桶中浸泡,桶內(nèi)需有足量的清水以沒(méi)過(guò)浸泡物品。
注: 可回收器皿必要時(shí)先初步涮洗后再放入桶內(nèi),尤其是培養(yǎng)瓶或血清管中有大量高營(yíng)養(yǎng)的液體殘留時(shí),容易使桶內(nèi)的清水長(zhǎng)菌。保證浸泡的瓶、管內(nèi)*被清水充滿(mǎn),而不是在裝有大量空氣的情況下被壓倒桶底?! ?br />2.清水沖洗后及時(shí)放入酸缸浸泡,應(yīng)由使用者本人及時(shí)清洗晾干備用,操作時(shí)請(qǐng)注意帶橡膠手套,小心操作。
注: 禁止長(zhǎng)時(shí)間浸泡于清水中,此時(shí)細(xì)菌可能已在桶中生長(zhǎng)并釋放內(nèi)毒素。細(xì)菌內(nèi)毒素很難通過(guò)常規(guī)濕熱滅菌步驟去除干凈,即使干烤也不能保證其*失活。內(nèi)毒素對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)及多種實(shí)驗(yàn)均有較大影響。
洗滌程序:清水沖十次以上去除重金屬殘留,然后沖去離子水5次,再用超純水5次,倒置于烘箱中晾干。并及時(shí)包扎滅菌。
第六條 冰箱、試劑等相關(guān)操作規(guī)則
1.從冰箱取放物品動(dòng)作要迅速,關(guān)門(mén)時(shí)要檢查門(mén)是否關(guān)好。按類(lèi)別存放試劑。嚴(yán)禁長(zhǎng)時(shí)間敞開(kāi)冰箱門(mén)。
2.各人存放于冰箱內(nèi)的培養(yǎng)液、生化試劑、樣品要注明姓名、配制日期、樣品名稱(chēng),特殊試劑需獲得細(xì)胞室管理人員同意后方能放置。不得使用他人的培養(yǎng)液或其他生化試劑。
3.分裝好的血清長(zhǎng)時(shí)間保存于-80℃,使用前放于4℃預(yù)解凍。原則上解凍好的血清應(yīng)全部配成含血清的培養(yǎng)基備用,若有剩余,則暫存于4℃并盡快使用。盡量不要使用他人開(kāi)過(guò)的血清,以免交叉污染。
4.細(xì)胞室內(nèi)的冰箱空間有限,盡量?jī)H放置使用頻率較高的試劑。請(qǐng)勿將一些閑置試劑,污染試劑長(zhǎng)期放置在細(xì)胞室。
5.工作人員會(huì)定期對(duì)冰箱進(jìn)行清理,發(fā)現(xiàn)無(wú)標(biāo)記,過(guò)期試劑等違規(guī)物品將全部清除出去,并且查找試劑配置人給予警告。
第七條 進(jìn)入細(xì)胞室物品控制
1.所有進(jìn)入細(xì)胞室的物品需經(jīng)過(guò)傳遞窗,盡量經(jīng)過(guò)紫外照射,酒精表面消毒。
2.嚴(yán)禁將可能含有污染物或病原菌的實(shí)驗(yàn)物品帶入細(xì)胞室。
3.細(xì)胞室內(nèi)僅放置少量實(shí)驗(yàn)必須耗材即可,不得整箱搬入,出現(xiàn)潔凈室內(nèi)物品堆積狀況。
4.細(xì)胞室內(nèi)儲(chǔ)物柜的物品放置由相關(guān)管理人員安排,并做標(biāo)記。
第八條 細(xì)胞室清潔守則
1.每周值日生時(shí)間從周六開(kāi)始,至下周五結(jié)束。
2.日常維護(hù):注意培養(yǎng)箱顯示正常,顯微鏡,冰箱,超凈臺(tái)的正常使用與維護(hù)。細(xì)胞室內(nèi)以及門(mén)口生物樣品垃圾桶的及時(shí)清理。
3.每周大清潔:每周五下午五點(diǎn)用新潔爾滅打掃細(xì)胞室。
清潔順序:擦超凈臺(tái)(用酒精棉球);用新潔爾滅擦桌面,培養(yǎng)箱,超凈臺(tái)以及冰箱外壁,及桌上的儀器,細(xì)胞室墻面,傳遞窗,風(fēng)淋室;給水浴鍋加水或換水,細(xì)胞室衣柜和拖鞋擺放整齊,拖地,紫外消毒細(xì)胞室30分鐘。
注:若上周值日生及時(shí)給培養(yǎng)箱內(nèi)水槽加足水,根據(jù)經(jīng)驗(yàn)未來(lái)一周內(nèi)培養(yǎng)箱不會(huì)干水,但值日生仍應(yīng)經(jīng)常檢查,以便及時(shí)發(fā)現(xiàn)異常情況。切記給培養(yǎng)箱加滅菌水。
4.在沒(méi)有出現(xiàn)問(wèn)題的情況下,每2個(gè)月清潔一次培養(yǎng)箱:先將培養(yǎng)箱中的物品取出暫存于超凈臺(tái)內(nèi),對(duì)于比較敏感的細(xì)胞可以暫存于另一個(gè)培養(yǎng)箱;將培養(yǎng)箱內(nèi)的不銹鋼板取出,包括4塊橫板和左右2塊立著的架子,用酒精棉球清潔鋼板和培養(yǎng)箱內(nèi)壁;啟動(dòng)培養(yǎng)箱自消程序。
第九條 人員培訓(xùn)
1.由將要做細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的人員提出申請(qǐng),填寫(xiě)細(xì)胞室使用申請(qǐng)表。
2.細(xì)胞室負(fù)責(zé)老師視申請(qǐng)人數(shù)酌情安排培訓(xùn)時(shí)間,培訓(xùn)內(nèi)容包括安全培訓(xùn)、理論知識(shí)與實(shí)踐操作培訓(xùn)。
3.培訓(xùn)考核合格后由導(dǎo)師、培訓(xùn)老師、細(xì)胞室負(fù)責(zé)人簽字確認(rèn)授予其細(xì)胞室使用權(quán)限。
4.培訓(xùn)不合格者重新參加培訓(xùn)。
第十條 制度的實(shí)施與處罰
1.細(xì)胞室負(fù)責(zé)人以及管理人員密切關(guān)注細(xì)胞室的使用情況,發(fā)現(xiàn)違反規(guī)章操作者首先給予提醒,但須做記錄。
2.對(duì)于一周內(nèi)違反3次以?xún)?nèi)者予以警告,3-5次者給予停止細(xì)胞室使用權(quán)限2周,超過(guò)5次者停用其對(duì)細(xì)胞室使用權(quán)限,需重新參加培訓(xùn)后才能再次使用。
第三章 附則
本規(guī)章制度從公布之日起開(kāi)始執(zhí)行,由生物醫(yī)學(xué)工程團(tuán)隊(duì)實(shí)驗(yàn)室管理委員會(huì)負(fù)責(zé)解釋及更正。本實(shí)驗(yàn)室追求不斷地進(jìn)步,各位老師及使用人員若有良好的建議可與細(xì)胞室負(fù)責(zé)人或?qū)嶒?yàn)室管理委員會(huì)成員溝通,我們會(huì)及時(shí)協(xié)調(diào),旨在為團(tuán)隊(duì)提供和諧,的實(shí)驗(yàn)條件。